PRUEBA DE FILTRADO RPR PARA SIFILIS

Para La Determinacion de RPR en Suero

SUMARIO Y EXPLICACION

La PRUEBA Reagente Rápido de Plasma (RPR) es una Prueba de Floculación no Treponemal que se usa para detectar y cuantificar el reagente, que es un anticuerpo presente en el suero o plasma de las personas con sífilis, o con otras enfermedades treponemales. Ocasionalmente, las personas con otras enfermedades o condiciones, también pueden tener reacción en las pruebas no treponemales.

PRINCIPIO

El treponema palidum, es el reagente etiológico responsable por producir sífilis por lo menos en dos clases de anticuerpos en inyecciones humanas. La Prueba de Absorción-Anticuerpo Treponemal (FTA-ABS), (1) o MHA-TP, en tanto que el reagente anticuerpo se detecta por las pruebas no treponemales tales como las Tarjetas de Prueba de Antigeno RPR (2), en presencia del anticuerpo reagente en la muestra reactiva, la preparación del antígeno RPR, producirá floculación consistente en  manchas que contrastan con lo blanco de la tarjeta de la prueba. En contraste, las pruebas no reactivas conducirán a una suspensión homogénea ligeramente gris.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego del Reactivo Cat. No. S-8000 incluye:

ANTIGENO CARBONICO RPR - (Cat. No. S-8001)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.003%   cardiolipin,  0.020-0.022% lecitina,  0.09% colesterol, 0.0125 MEDTA, 0.01 M  Na2HP04, 0.01 M  KH2P04, 0.1%  Timersol, 0.0188%  Carbón, y 10% Cloruro de Choline. Suero humano conteniendo 0.1% de ácido de sodio como preservativo.

PRECAUCIONES:

Este producto es para uso diagnóstico in-vitro solamente. El envase dispensador debe lavarse y la aguja se debe verificar por el siguiente procedimiento:

1. Una la aguja a una jeringa de 2 ml.

2. Llene la jeringa con antigeno y elimine las burbujas de aire.

3. Cuente el número de gotas dispensadas en 0.5 ml sosteniendo la aguja en una posición vertical.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Cuando no se usa, almacene los reactivos y controles a 2°- 8° C. NO CONGELE, antes de usar, permita a los reagentes y controles entibiarse a temperatura ambiente. El antigeno debe agitarse ligeramente para asegurar la homogeneidad antes de usarse. Quite solamente el antigeno suficiente de la botella de vidrio para los días de uso de la prueba.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

El plasma EDTA y el suero calentado y no calentado pueden usarse. La muestra debe estar libre de contaminación bacterial y hemolisis. Las muestras de suero fresco y no contaminado deben almacenarse a 2°-8° C hasta cinco días antes del exámen. De otro modo, las muestras de suero deben mantenerse congeladas. Las muestras de Plasma deben examinarse dentro de 48 horas, después de ese tiempo la muestra debe desecharse.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES SUMINISTRADOS:

1. Control de reactivo

2. Control Mínimo de reactivo

3. Control no reactivo

4. Sistema de Entrega de Antígeno: botella gotero de 3 ml y aguja que dispensará 60' +\- 2 gotas\mL.

5. Tarjetas de Prueba

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS:

1. Juego de Rotación Mecánico a 100+\ 2 r.p.m. con cubierta de humedad.

2. Cronómetro

3. Pipetas automáticas

4. Tubos de ensayo

5. Guantes

6. Fuente de luz

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:

NOTA: Todas las pruebas, muestras de control de suero y reactivos, deben estar a temperatura ambiente antes de usarse.

Prueba de Tarjeta Cualitativa

1. La persona que realiza este exámen debe referirse a la sección RESULTADOS para familiarizarse con los resultados esperados antes de realizar el exámen. De otra manera, realice el exámen con los controles suministrados para familiarizarse con los resultados esperados. Coloque una gota de CADA UNO de los controles en los círculos separados de la tarjeta de prueba y siga los PASOS 3 -5 a continuación.

2. Coloque una gota de la muestra de suero o plasma en un círculo separado en la tarjeta de prueba con las pipetas agitadoras desechables suministradas. Use una pipeta agitadora para cada prueba.

3. Usando el extremo plano de las pipetas agitadoras, extienda la muestra en toda el área del circulo de la prueba.

4. Mezcle bien el reactivo de carbón antigeno. Una las agujas a la botella gotero. Exprima la botella gotero para soltar aire, y vierta suficiente reactivo en la botella. Deseche las primeras gotas, y luego coloque una gota (17 uL) del antigeno (mientras sostiene la botella en posición vertical) a un círculo de la prueba contenien muestra. NO MEZCLE la prueba y el antigeno.

5. Coloque la tarjeta en un girador automático y coloque una cubierta de humedad sobre la tarjeta. Gire a 100 r.p.m. durante 8 minutos. Después de la rotación, debe hacerse una breve rotación manual e inclinación de  (3 -4 veces) para ayudar a diferenciar los resultados reactivos de los no reactivos. Lea los resultados microscópicamente en estado "húmedo" bajo una lámpara incandescente de alta intensidad.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:

El resultado reactivo se indica por la presencia de grandes agregados en el centro o la periferia del círculo de la prueba. Todas las muestras que exhiben cualquier grado de reactividad o agresividad deben ser  cuantificadas (siga el Procedimiento de la Prueba Cunatitativa). La agresividad es algunas veces indicativo de una  muestra con un prozone. Las muestras de reactivo mínimo están indicadas por la presencia de agregados pequeños o finos. Un resultado negativo (no reactivo) mostrará una apariencia ligeramente gris.

Prueba Cuantitativa de Tarjeta

1. Coloque una gota (00.5 ml) de muestra usando una pipeta agitadora en el círculo1.

2. Usando una pipeta automática de 0.05 ml (o pipeta agitadora), coloque una gota de 0.9%  de solución salina en los círculos para ser numerados del 2 a 5. NO EXTIENDA.

3. Usando una pipeta volumétrica adecuada, coloque 0.05 ml de la muestra de la prueba en el círculo 2. Inserte la punta de la pipeta en la mezcla resultante y mézclelos al vertir la mezcla de arriba a abajo en la pipeta aproximadamente 8 veces. Evite cualquier

formación de burbujas y transfiera 0.05 ml las muestras mezcladas a un tercer círculo. Repita esta serie de procedimientos de dilución en el círculo 5 y deseche 0.05 ml del último círculo. Los círculos 1-5 representan una serie de dilución como se muestra a continuación.

Círculo 1 2 3 4 5

Dilución 1:1 1:2 1:4 1:8 1:16

4. Usando el extremo plano de la pipeta agitadora, extienda las muetras diluídas sobre toda el área de los círculos de la prueba empezando en el círculo No.5 (la dilución más alta). Repita este procedimiento de extensión a los círculos 4, 3, 2 y 1.

5. Coloque una gota de antigeno de carbón de la botella gotrero a cada círculo. NO MEZCLE. Coloque la tarjeta en el girador automático y gire por ocho munutos.

6. Inmediatamente después de los ocho minutos de rotación, lea los resultados microscópicamente en estado "húmedo" bajo una lámpara incandescente de alta intensidad. El  titre de la muestra  es el recíproco de la dilución más alta para mostrar agregados microscópicos (ver el DIAGRAMA en la sección de RESULTADOS).

7. Si la muestra es positiva en la dilución 1:50, las series de la dilución deben extenderse como se indica a continuación:

a. Prepare una dilución 1:50 de suero no reactivo en 0.09% de salina. Esto es para usarse en la elaboración de una dilución de 1:32 y  más alta, de las muestras a ser examinadas. Coloque 0.05 mL de esta solución diluida en los círculos numerados del 2 al 5.

b. Prepare una dilución 1:16 de la muestra del exámen al agregar 0.1 mL de suero a 1.5 mL de 0.9% de salina. Mezcle firmemente. Coloque 0.05 mL de dilución 1:16 de la muestra del exámen en los círculos 1 y 2.

c. En el círculo 2, inserte la punta de la pipeta automática de 0.05 ml en la mezcla resultante (muestra y diluyente) y mezcle al vertir la mezcla con un movimiento de la pipeta de arriba hacia abajo aproximadamente 8 veces. Evite cualquier formación de burbujas. Transfiera 0.05 mL de la muestra mezclada en el círculo siguiente. Repita este procedimiento de la mezcla. Continúe esta serie de dilución al círculo No. 5 y deseche 0.05 mL del último círculo. Los círculos del 1 al 5 ahora representan una serie de dilución como se indica a continuación:

Circulo 1 2 3 4 5

Dilución 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

d. Continúe con el procedimiento de la prueba descrito bajo los PASOS 4 y 5 De la Tarjeta de Prueba Cuantitativa.

e. Continúe las diluciones hasta alcanzar un titre de punto final.

CONTROL DE CALIDAD

El reactivo, los controles negativos y los recativos mínimos se incluyeron con el juego de la prueba para monitorear el desempeño del reactivo. Si los resultados esperados no se observan, el reactivo no debe usarse.

LIMITACIONES

Las reacciones positivas falsas ocurren ocasionalmente con la prueba antigeno de carbón RPR. Tales reacciones algunas veces ocurren con el abuso de drogas y enfermadades tales como lupus eritomatoso, mononucleosis, lepra, neumonía viral y después de las vacunas de viruela. Las muestras de la prueba RPR Reactivo deben sujetarse a futuras confirmaciones, como se recomienda en el manual para exámenes de sífilis.  Como todo procedimiento de prueba serológica, el diagnóstico de sífilis debe hacerse en un solo resultado reactivo. La temperatura del reactivo y de las muestras es crítica para examinar el resultado. Las muestras de plasma de más de 48 horas pueden dar resultados erróneos.

CARACETRISTICAS DE DESEMPEÑO:

El antigeno RPR se examinó de acuerdo al Procedimiento de la Tarjeta de Prueba de los Centros para Control de Enfermedades (CDC). La prueba RPR fue comparada con el antigeno CDC RPR y con otros comercialmente disponibles. El antigeno RPR es una evaluación clinica. Un total de 205 muestras se usaron en este estudio y el acuerdo arrasador de los resultados fue 100%. Todas las 109 pruebas negativas dieron resultados negativos cuando se examinaron por tres tipos de antígeno RPR. Las 96 pruebas positivas dieron resultados positivos cuando se examinaron bajo los tres tipos de antigeno RPR. Solo cuatro de las 96 pruebas positivas fueron distintas por una dilución titre de diferencia cuando las pruebas cuantitativas se realizaron. No se observó ninguna desviación específica.

Muestra Pulso de la Prueba Antigeno CDC Prueba Competidora

Positivo 96 96 96

Negativo 109 109 109

REFERENCIAS

1. Hunter, E.F., Deacon,W.E., y Meyer, P.E., An Improved FTA Test for Syphilis, The Absortion Procedure (FTA - ABS) Public Health Reports, 79, 410-412, 1964.

2. Manual of Tests for Syphilis, Public Health Service Publication. No.411, 1969.

3. Manual of Tests for Syphilis, Public Health Service Publication. No.411, 1990.