URICASA  ACIDO  URICO  PROCEDIMIENTO

Metodo para la Determinacion de Acido Urico en Suero

SUMARIO Y EXPLICACION

El ácido úrico del suero es el producto final del metabolismo de las purinas en los tejidos y es eliminado a través de los riñones por filtración celular. Altos niveles de ácido úrico son el resultado de enfermedades como leucemia, polisitema, la ingestión de comidas ricas en núcleo-proteínas (por ejemplo hígado y riñón) o cuando la función renal está deteriorada. La gota resulta del depósito de ácido úrico en las articulaciones.

El ácido úrico ha sido ensayado por una variedad de procedimientos incluyendo la reducción del ácido fosfotúngstico (2), por medición directa a 293 nm antes y después del tratamiento con uricasa (3), reducción férrica (4), y métodos enzimáticos colorimétricos utilizando uricasa. El procedimiento uricasa ácido úrico Eagle es un método enzimático que utiliza la copulación del 4 aminoantipirina 3-5 dicloro-2-hidroxibencenosulfonato peróxido de hidrógeno en presencia de peroxidasa para formar un complejo coloreado que se lee a 520 nm.

PRINCIPIO

El ácido úrico es oxidado por la uricasa en alantoína y peróxido de hidrógeno. DHBS+4 aminoantipirina + peróxido de hidrógeno, en presencia de peroxidasa forma un compuesto coloreado que se mide a 520 nm. La intensidad del color es directamente proporcional a la cantidad de ácido úrico en la muestra.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Equipo Reactivo Cat. No. 4250 incluye:

REACTIVO URICASA  - (Cat. No. 4251)

INGREDIENTES REACTIVOS:

4-amino antipirina 0.4 mM; 3-5 Dicloro-2-Hidroxibencen-sulfonato 2 mM Uricasa 150U/L; Peroxidasa 5000 U/L; Estabilizador añadido, amortiguado a pH 7.5

PRECAUCIONES:

Evítese el contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contacto lávese con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese a 2-8ºC. Estable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase, si el vial permanece sin abrir y sellado perfectamente.

Después de reconstituido el reactivo es estable por 31 días, almacenado a 2-8ºC. o por 2 días a temperatura ambiente.

DETERIORACION:

El reactivo sin reconstituir deberá ser un polvo seco, la presencia de humedad indica deterioro. No se use. No use el reactivo si la lectura de absorbancia del blanco es mayor de 0.40 a 520 nm.

Después de la reconstitución el reactivo debe ser claro y con un ligero color de rosa. La turbidez indica deterioro.

RECONSTITUCION DEL REACTIVO:

Adicione la cantidad de agua destilada indicada en el vial y mezcle sin agitar.

URICASA ACIDO URICO CALIBRADOR - (Cat. No. 4252)

INGREDIENTES REACTIVOS:

5.0 mg/dl de ácido úrico. Preservativo añadido.

PRECAUCIONES:

Evítese el contacto con ojos, piel o ropa. En caso de contacto lávese con agua.

ALMACEN Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 2-8ºC. Estable hasta la fecha de caducidad indicada en el vial.

DETERIORO:

El no obtener, al ensayar, los sueros controles normales los valores asignados es indicativo de deterioro.

INSTRUMENTOS

Use un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 520 nm. (Intervalo aceptable 500-540 nm.) Para su uso en instrumentos automatizados consulte el manual de aplicaciones.

RECOLECCION DEL ESPECIMEN

PRECAUCIONES:

1. Se recomienda el uso de suero no hemolizado.

2. Muestras lipémicas requieren blanco de suero.

3. Recolección de orina por 24 horas, puede ser utilizada.

ALMACEN DE LA MUESTRA:

El ácido úrico permanece estable en el suero por 7 días a temperatura de 2-8ºC. y por 6 meses en congelación.

ADITIVOS:

No se requieren aditivos o preservativos especiales.

SUBSTANCIAS INTERFERENTES:

Las muestras lipémicas requieren blanco de suero, la bilirrubina y el ácido ascórbico pueden causar niveles bajos falsos.

PROCEDIMIENTO

MATERIAL PROPORCIONADO:

Reactivo de uricasa y uricasa ácido úrico calibrador.

MATERIAL REQUERIDO, PERO NO SUMINISTRADO:

1.   Pipetores de 0.05 ml. y 1.0 ml.

2. Incubadora capaz de mantener 37º C.

3. Cronómetro, tubos de cultivo y soporte.

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de onda 520 nm.

Selección de filtros 500-550 nm.

Tipo de reacción Punto final

Temperatura de incubación 37ºC.

Tiempo de incubación 5 minutos

Volumen de la muestra 0.025 ml

Volumen del reactivo 1.0 ml

Volumen total 1.025 ml

Normal bajo 1.5 mg/dl

Normal alto 7.0 mg/dl

Valor de calibrador 5.0 mg/dl

PROCEDIMIENTO

1. Coloque 1.0 ml. del reactivo de Uricasa dentro de los tubos etiquetados como:

blanco de reactivos, calibrador, control, muestra 1, etc.

2. Precaliente tubos a 37ºC. por 5 minutos.

3. Añada 0.025 ml. de muestra a los tubos respectivos.

4. Incube los tubos a 37ºC. por 5 minutos.

5. Ajuste el instrumento a cero de absorbancia a 520 nm usando blanco de reactivos.

6. Lea y registre los valores de absorbancia para cada muestra.

NOTA: Para instrumentos de lectura directa ajuste a cero con el blanco de reactivo y con el calibrador ajuste la mezcla del valor del calibrador. Lea las concentraciones del problema directamente.

ESTABILIDAD DE LA REACCION FINAL:

Leer las muestras 10 minutos después de desarrollado el color.

CALIBRACION:

El calibrador del Acido Urico Uricasa es proporcionado. Consulte los valores asignados en la etiqueta.  No es necesario hacer curva de calibración, la linearidad del procedimiento se extiende hasta 25 mg/dl. Valores por arriba de 25 mg/dl deberán ser diluidos 1 :1 con solución salina y reensayados; el resultado se multiplica por 2.

CONTROL DE CALIDAD:

La veracidad de estos resultados deberá ser monitoreada de rutina usando materiales de control de calidad apropiados (normal y anormal) analizados de igual manera que los problemas.

CALCULOS DE RESULTADOS

La siguiente ecuación es usada para determinar la concentración de la muestra desconocida.

PROBLEMA (mg/dl) =

ABS PROBLEMA      

-------------------------   X    CONC. CALIBRADOR

ABS CALIBRADOR

EJEMPLO:

En una serie de pruebas la absorbancia del calibrador es = 0.130.

La concentración del ácido úrico de la muestra desconocida es:

0.130      

--------   X   5.0 = 5.20 mg/dl

0.125

VALORES NORMALES (7)   

Hombres: 3.5 - 7.0 mg/dL

Mujeres: 2.5 - 6.0 mg/dL

Orina: 250 - 750 mg/dL

Cada laboratorio debe de establecer sus propios valores de referencia

CARACTERISTICAS DEL ENSAYO

PRECISION:

Dentro del ensayo: Sueros normales y anormales fueron ensayados 20 veces por 10 días cada uno para la precisión

MEDIA / STD.DEV / %CV

DENTRO DEL ENSAYO

Normal 3.3 / 0.50 / 1.4

Anormal 10.4 / 0.07 / 1.1

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 3.4 / 0.12 / 2.1

Anormal 10.3 / 0.15 / 1.6

ESPECIFICIDAD:

Una comparación del procedimiento Acido Úrico Uricasa con otros métodos enzimáticos comerciales, muestran una correlación del 99.8%

SENSIBILIDAD:

Este procedimiento tiene una sensibilidad por 0.05 mg/dl por 0.001 unidades de absorbancia.

REFERENCIAS

1. Tietz, NW, "Fundamentales of Clinical Chemistry", 2nd ed., W.B. Saunders Co. Philadelphia, 1976, p. 999

2. Carrol, J., Colburn, H.m Douglass, and Babson, A.L., Clin Chem, 17, 158 ( 1971).

3. Remp, D.G., Clin Chem 6, 1 (1970).

4. Morin, LG, and Prox, J., Am Jour Clin Path, 60, 691 (1973).

5. Praetoris, E., Poulson, H., Scand. Jour. Clin Invest, 5, 273 (1953).

6. Young, DS, Pestaner, LCV, and Gibberman, V., Clin Chem, 21,373D (1975).

7. Tietz, NM, "Fundamentales of Clinical Chemistry", 2nd ed., WB Saunders Co. Philadelphia , p.729.,. (1976).