SUMARIO Y EXPLICACION

La urea representa el producto final de catabolismo protéicoy es depurado por los riñones mediante filtración glomerular. El nitrógeno de urea es la prueba más común realizada para la función renal, junto a la prueba de creatinina deriva diagnósticos de hiperuremia diferenciados. Entre las causa de urea alta, están la glomerulonefritis aguda, nefritis crónica, riñón polisístico, nefroesclerosis, nefrosis tubular y obtsrucción de las vias urinarias (1).

PRINCIPIO

El PROCEDIMIENTO DE NITROGENO DE UREA (DICETIL) es una modificación del método diacteil descrito por Marsh (2). El monóxido diacetil reacciona con la urea para formara un color rosa, que puede ser medido colorimétricamente a 520 nm.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego de Reactivo Cat. No. 4050 incluye:

REACTIVO A COLOR - (Cat. No. 4051)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.17% de Monóxido Diacetil

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con piel, ojos y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua. No ingiera. Si se ingiere, ealice lavado gastro-intestinal.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad. Protejase contra la luz.

DETERIORO:

El reactivo debe ser claro e incoloro, amarillo pálido. La oscuridad o la turbidez indicarán deterioro.

REACTIVO ACIDO - (Cat. No. 4052)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.003% Cloruro Férrico, 0.06% de Acido Fosfórico y 10% de Acido Sulfúrico concentrado.

PRECAUCIONES:

Puede ser fatal si se ingiere. No pipetee con la boca. Evite contacto con la piel, ojos y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua y aplique una solución de bicarbonato. Si se ingiere, consuma leche de magnesia y llame a su médico.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad en el frasco.

DETERIORO:

El reactivo debe ser claro e incoloro.

CALIBRADOR DE NITROGENO DE UREA - (Cat. No. 4004)

INGREDIENTES REACTIVOS:

30 mg/dL de Nitrógeno de Urea. Preservativo añadido.

PRECAUCIONES:

No se ingiera.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 2 - 8° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

DETERIORO:

La solución estándar debe ser clara e incolora. La turbidez indicará deterioro.

INSTRUMENTOS

Use un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 520 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. Se recomienda suero o plasma no hemolizado.

2. Evite la contaminación.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

El suero de Nitrógeno de Urea aparece estable por 8 horas a temperatura ambiente, 72 horas, a 2 - 8° C, y hasta 6 meses cuando está congelada.

ADITIVOS:

No se necesitan aditivos o preservativos especiales.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

Young et al (3) han revisado los efectos de medicamentos en suero de Nitrógeno de Urea.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES SUMINISTRADOS:

REACTIVO A COLOR DE NITROGENO DE UREA (Cat. No. 4051), REACTIVO DE ACIDO DE NITROGENO DE UREA (Cat. No. 4052), y CALIBRADOR DE NITROGENO DE UREA (Cat. No. 4004).

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS:

1. Micropipeta de 0.02 mL

2. Pipeta o dosificador de 3.0 mL y 1.0 mL

3. Incubador capaz de mantener 100° C.

4. Tubos de ensayo, tablero y cronómetro.

5. Instrumento capaz de leer 520 nm.

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de Onda 520 nm

Selección de Filtro 500-550 nm

Tipo de Reacción Punto Final

Tiempo de la Reacción 10 minutos

Temperatura 100° C

Volumen de la Muestra 0.02 mL

Volumen de Reactivo a Color 1.5 mL

Volumen de Reactivo Acido 3.0 mL

Volumen Total 4.52 mL

Normal Bajo 8.mg/dL

Normal Alto 25 mg/dL

Valor del Calibrador 30 mg/dL

PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:

Este procedimiento no ha sido aplicado a los instrumentos automatizados.

PROCEDIMIENTO MANUAL:

1. Pipetee 0.02 mL de la Muestra en tubos etiquetados Blanco de Reactivo, Control, Muestra 1, etc. Use D-h20 para muestra en blanco de reactivo.

2. Coloque 1.5 mL de Reactivo a Color en cada tubo.

3. INMEDIATAMENTE añada 3.0 mL de Reactivo Acido a los tubos y mezcle bien.

4. Coloque todos los tubos en un incubador precalentado a 100 ° C por 10 minutos.

Alternativa: Coloque en agua hirviendo por 8 minutos.

5. Retire y rápidamente enfríe a temperatura ambiente con agua fría.

6. Ponga el instrumento cero a 520 nm usando Blanco de Reactivo.

7. Lea y registre las absorbencias del Calibrador, Control y Muestras Desconocidas.

NOTA: Para una lectura directa del instrumento, ponga la lectura a concentración estándard y las concentraciones Desconocidas directamente.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO DE REACCION FINAL:

Las muestras de la prueba deben leerse dentro de 60 minutos después del desarrollo del color.

CALIBRACION:

No es necesario realizar una curva de calibración con este procedimiento, ya que la reacción es lineal en una variación de 0-150 mg/dL. Sin embargo, un Calibrador y Blanco de Reactivo deben determinarse con cada juego de Desconocidos ensayados. Use CALIBRADOR DE NITROGENO DE UREA (Cat. No. 4004) el cual se incluye en el juego de Reactivo para este propósito.

CONTROL DE CALIDAD

La confiabilidad de los resultados de la prueba debe moinitorearse rutinariamente usando materiales adecuados de control de calidad (normal y anormal) analizados en la misma manera que los usados para los Desconocidos. EAGLE DIAGNOSTICS ofrece CHEM-TROL NORMAL (Cat.No.8100) y CHEM-TROL ELEVADO (Cat. No. 8200) para este propósito. La falla para alcanzar los valores ensayados de Control de Suero preparado fresco deben investigarse antes de reportar los valores del paciente.

CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación se usa para determinar las concentraciones Desconocidas:

Desconocidas (mg/dl) =

Abs. Desc.

-------------- X Conc. Cal. (mg/dL)

Abs. Cal.

EJEMPLO:

Un Calibrador de 30 mg/dL tuvo una Abs. = 0.402 mientras el Desconocido tuvo Abs. = 0.512. La concentración de Nitrógeno de Urea del Desconocido es:

0.512

------- X 30 mg/dL = 38 mg/dL

0.402

LIMITACIONES

El desempeño de este procedimiento incluye el uso de un ácido fuerte a temperaturas extremas, deben tomarse grandes precauciones para evitar lesiones.

VALORES ESPERADOS 8 - 25 mg/dL

Las variaciones representan el 95% de intervalos de confiabilidad de una población clínicamente normal. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores esperados.

CARACETRISTICAS DE DESEMPEÑO
 
 

LINEARIDAD:

Este método es lineal a 150 mg/dL.

PRECISION:

Sueros de control normal y anormal fueron ensayados 20 veces cada uno para una precision de un solo ensayo y por 10 días para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

UN SOLO ENSAYO

MEDIA / DESV. STD. / % CV

Normal 15.0 / 0.25 / 1.5

Anormal 46.0 / 1.35 / 2.8

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 15.0 / 0.32 / 2.0

Anormal 47.0 / 1.75 / 3.5

ESPECIFICIDAD:

Una comparación de este PROCEDIMIENTO DE NITROGENO DE UREA (DIACETIL) con otro método comercial ampliamente usado mostró una correlación de 99% con muestras en una variación normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

Este procedimiento tiene una sensibilidad de 0.1 mg/dL por 0.001 unidades de absorbencia.

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clin. Chem., 2nd ed., W.B. Saunders Co. Philñadelphia, 1982, p.991.

2. Marsh, W.H., Clin Chem II, p.624 (1965)

3. Young, D.S., Pestaner,L.C., y Gibberman, V., Clin. Chem., Vol.21, p.371 D (1975)