SUMARIO Y EXPLICACIÓN

La Glucosa es la mayor fuente de energia para el cuerpo humano y se deriva principalmente de carbohidratos en la dieta diaria (granos, vegetales y legumbres), del almacenamiento de carbohidratos en el cuerpo, y de la síntesis de glucosa de la proteína y la media glicerosa de trigliceridos.Cuando la energia diaria tomada excede la expansión diaria. El exceso se convierte en grasa y se almacena en los tejidos. Cuando las necesidades de energia no son suficientes con las calorias tomadas, la glucosa se produce de rompimientos de carbohidratos almacenados y de fuentes de no-carbohidratos. (p.e., aminoácidos gluconeogénicos, lactosa y gliserol) (1).

El nivel de glucosa en la sangre se mantiene dentro de un rango estrecho a traves de una variedad de influencias. Mientras hay alguna variación en la glucosa de la sangre al cambiar las circunstancias (amamantar, ayuno prolongado), los niveles superiores o inferiores de la variación normal generalmente indican enfermedad (1).

Las determinaciones de glucosa han probado su utilidad en el diágnostico y manejo de la Diabetes Melitus. Las pruebas de tolerancia a la Glucosa son útiles en el diagnóstico de diabetes, hipoglicemia y enfermedades de los sistemas renal, pituitario y tiroidal (1).

Trinder introdujo un procedimiento totalmente enzimático (2) que mejoró en gran cantidad la especificidad y ofrece un fácil manejo. Este procedimiento está basado en un método modificado de Trinder en el cual el p-hidroxibencensulfonato reemplaza al fenol en la fórmula brindando un reactivo menos corrosivo y mas seguro.

PRINCIPIO

La glucosa oxidasa convierte la glucosa en peróxido de hidrógeno y ácido D-glucónico. La peroxidasa cataliza la oxidación del peróxido de hidrógeno a 4-aminofenazona con la subsecuente unión con el p-hidroxibencensulfonato. El producto final es un colorante hidroquinoleína el cual absorbe a 500 nm. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de la glucosa.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego de Reactivo Cat. No. 2810 incluye:

AMORTIGUADOR GLUCOSA - (Cat. No. 2811)

INGREDIENTES REACTIVOS:

P-hidroxibencensulfonato de 18 mM en una solución amortiguada preservada en una solución Azida Sodica.

PRECAUCIONES:

No se ingiera, la toxicidad no ha sido establecida. Evite el contacto con piel, ojos y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 2 - 8°C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

REACTIVO DE ENZIMA GLUCOSA -(Cat. No. 2812)

INGREDIENTES REACTIVOS:

Glucosa oxidasa, peroxidasa y 4 aminoantipirina en una solución liquida con ácido de sodio para preservarlo.

PRECAUCIONES:

No se ingiera, la toxicidad no ha sido establecida. Evite el contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 2 - 8° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

CALIBRADOR DE GLUCOSA - (Cat. No. 2802)

INGREDIENTES REACTIVOS:

100 mg/dL D-glucosa. Con preservativo añadido.

PRECAUCIONES:

No se ingiera, la toxicidad no ha sido establecida. Evite el contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 2 - 8°C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

INSTRUMENTOS

Use un espectrofotómetro o un colorímetro calibrado a 500 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. Se recomienda el suero libre de hemólisis. Se puede usar plasma heparinizado con EDTA, citrato u oxalato.

2. Los niveles de glucosa disminuyen en sangre completa a un promedio de 7% por hora.

3. Los sueros turbios o ictéricos y orina, requieren de un blanco de muestra.

4. Young et al (3) revisaron los efectos de medicamentos en los niveles de glucosa.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

La glucosa cérica aparece estable por 72 horas a 2 - 8° C. El fluido cerebroespinal frecuentemente se contamina con bacteria y se debe procesar inmediatamente para evitar resultados falsos o se puede almacenar congelado. El plasma con fluoruro de sodio aparece estable por 24 horas a temperatura ambiente.

ADITIVOS:

No se necesitan aditivos o preservativos especiales.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

Las sustancias oxidadas por el peróxido de hidrógeno tales como ascorbato, bilirrubina y ácido urico en alta concentración pueden interferir (5). Young et al (3) revisaron los efectos del medicamento en los niveles de glucosa.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES SUMINISTRADOS:

AMORTIGUADOR DE GLUCOSA (Cat. No. 2811), REACTIVO DEL ENZIMA (Cat. No. 2812) CALIBRADOR DE GLUCOSA (Cat. No. 2802)

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS:

1. Micropipeta de 0.01 mL.

2. Pipeta o dosificador de 1.0 mL.

3. Incubador capaz de mantener 37° C.

4. Tubos de ensayo y tablero

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de Onda 500 nm

Selección de Filtro 480 - 520 nm

Tipo de Reacción Punto Final

Reactivo Precalentado 5 minutos

Tiempo de Reacción 10 minutos a 37° C

y Temperatura 20 minutos a 30° C

25 minutos a 25° C

Volumen de la muestra 0.01 mL

Volumen del Reactivo 1.00 mL

Volumen Total 1.01 mL

Normal Bajo 70 mg/dL

Normal Alto 110 mg/dL

Valor del Calibrador 100 mg/dL

PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:

Refiérase a la aplicación específica de los instrumentos para instrucciones.

PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO:

Añada 1.0 mL de la enzima del reactivo (Cat. No. 2812) a 25 mL de glucosa amortiguada (Cat. No. 2811). Mezcle y almacene en un contenedor de polietileno a 2- 8° C. Es estable por 90 días si se protege de la contaminación, almacene en un contenedor bien cerrado y manténgalo refrigerado.

DETERIORO:

Después de mezclar los componentes, el desarrollo de un ligero color rosa en el reactivo es normal. Si el reactivo tiene una absorbencia de !"0.25 cuando se mide contra agua destilada, no debe usarse.

PROCEDIMIENTO MANUAL:

NOTA: Para instrumentos que requieren un volumen total de >1.0 mL, aumente el volumen del REACTIVO DE TRABAJO DE LA GLUCOSA a 2.0 mL y el volumen de las pruebas a 0.02 mL. Y proceda como sigue:

1. Coloque 1.0 mL de REACTIVO DE TRABAJO DE GLUCOSA dentro de tubos etiquetados como Blanco de Reactivo, Calibrador, Control, Muestra 1.

2. Precaliente los tubos a 37° C por cinco minutos.

3. Coloque 0.01 mL de la Muestra dentro de tubos debidamente etiquetados y mezcle bien. Use D-H2O como muestra para el Blanco del Reactivo.

4. Incube todos los tubos a 37° C por 10 minutos.

5. Ajuste a cero el instrumento a 500 nm usando Blanco de Reactivo.

6. Lea y registre las absorbencias para el calibrador, Control y Desconocidos.

NOTA: Para instrumentos de lectura directa coloque la concentración en la pantalla y lea las concentraciones de las muestras directamente.

ESTABILIDAD Y REACCION FINAL:

Las muestras deberán leerse dentro de 15 minutos después del desarrollo del color.

BLANCO DE MUESTRA:

Las muestras turbias o ictéricas requieren de un Blanco de Muestra.

1. Añada 0.01 mL de la Muestra a 1.00 mL 0.9% de la solución de cloruro de sodio

2. Ajuste a cero el instrumento a 500 nm con 0.9% de la solución de cloruro de sodio.

3. Lea y registre la absorbencia del Blanco de la Prueba.

4. Sustraiga la absorbencia del blanco de la absorbencia del examén de la muestra medido en el Paso 6 del PROCEDIMIENTO MANUAL. Use éste valor para calcular la concentración de glucosa.

CALIBRACION:

No es necesario realizar una curva de calibración con éste procedimiento, ya que la reacción es lineal en un rango de 0-500 mg/dL. Sin embargo Un Calibrador y Blanco de Reactivo se debe determinar con cada juego de ensayos Desconocidos. Use el Calibrador de Glucosa (Cat. No. 2802) el cual se incluye en el juego del reactivo. Las muestras que exceden 500 mg/dL debe diluirse con 0.9% de solución de cloruro de sodio y ensayarse nuevamente. Multiplique el resultado de la prueba por el factor de dilución para obtener la respuesta final.

CONTROL DE CALIDAD:

La veracidad de los resultados deberá ser monitoreada en forma rutinaria usando materiales de control de calidad apropiados (normal y anormal) analizados en la misma manera como los Desconocidos. EAGLE DIAGNOSTICS tiene disponible CHEM-TROL NORMAL(Cat. No. 8100) y CHEM-TROL ELEVADO (Cat. No. 8200) para éste propósito.

CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación se usa para determinar las concentraciones Desconocidas:

Desconocido (mg/dL) =

Unk. Abs.

------------- X Cal. Conc. (mg/dL)

Cal. Abs.

EJEMPLO:

Un Calibrador de 100 mg/dL tuvo una Abs. = 0.150 mientras la Abs. Desconocida. = 0.660. La concentración de la Glucosa en la Desconocida es:

0.660

-------- X 100 mg/dL = 440 mg/dL

0.150

NOTA: Para convertir de mg/dL a unidades SI (mM/L), multiplique el resultado en mg/dL por 10 dL/L y divídalo entre 180 mg/mM.

LIMITACIONES

1. Los detergentes comerciales no iónicos causan decoloración en el producto final de reacción. Todo el material de vidrio debe enguajarse con agua destilada antes de usarse.

2. Los métodos de la Glucosa oxidasa no se usan directamente con muestras de orina ya que las altas concentraciones de sustancias tales como el ácido urico, interfieren con la reacción de la peroxidasa produciendo resultados bajos falsos.

VALORES ESPERADOS (5)

Suero / Plasma: 70 - 110 mg/dL
 
 

Fluido Espinal

Infantil: 60 - 80 mg/dL

Adulto: 40 - 70 mg/dL

Esta variación representa el 95% del intervalo de confianza de una población clínicamente normal. Cada laboratorio debe establecer sus propios valores esperados.

CARACTERISTICAS DEL DESEMPEÑO

LINEARIDAD:

Este método es lineal a 500 mg/dL

PRECISION:

El control de suero normal y anormal se ensayó 20 veces cada uno para establecer la precisión de ensayo y por 10 días para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

UN SOLO ENSAYO

MEDIA / DESV. STD. / %CV

Normal 84 / 0.8 / 1.0

Anormal 275 / 2.2 / 0.8

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 82 / 1.4 / 1.7

Anormal 279 / 3.9 / 1.4

ESPECIFICIDAD:

Una comparación de este PROCEDIMIENTO DE GLUCOSA (LIQUIDA / OXIDASA) con otro método comercial ampliamente conocido, mostró un 99% de correlación con las muestras en las variaciones normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

Este PROCEDIMIENTO DE GLUCOSA (LIQUIDA / OXIDASA) tiene una sensibiliodad de 0.4 mg/dL por 0.001 unidad de absorbencia.

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd. ed., W:B: Saunders Co., Philadelphia, 1986, p. 775.

2. Trinder, P., J. Clin. Path., 22, 246 (1969)

3. Young, D.S., Pestanes, L:C: y Gibberman, V., Clin. Chem., Vol.21, p. 304D (1975).

4. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd. ed. W:B. Saunders Co. Philadelphia, 1986, p. 788.

5. Tietz, N.W., Clinical Guide to Laboratory Tests, 2nd. ed. W.B. Saunders Co. Philadelphia, 1990, p. 246.