PROCEDIMIENTO DE CREATININA CINETICA
 

SUMARIO Y EXPLICACION

La Creatinina es el producto final del metabolismo creatino que ocurre principalmente en el músculo esquelético. A causa de que la Creatinina soporta una filtración glomerular que no es reabsorbida por los canales renales, su nivel en el suero proporciona un índice útil de función renal (1).

Las determinaciones de creatinina generalmente incluyen la reacción Jaffe o una de sus muchas modificaciones (2). El PROCEDIMIENTO EAGLE DIRECTO DE CREATININA está basado en la reacción Jaffe.

PRINCIPIO

En la reacción Jaffe, la creatinina reacciona con ácido picrico bajo condiciones alcalinas para formar un producto de color rojo que puede ser medido cinéticamente a 510 nm. El cambio en la intensidad del color rojo es directamente proporcional a la concentración de creatina.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego de reactivo Cat. No. 2610 incluye:

REACTIVO DE CREATININA DE ACIDO PICRICO - (Cat. No. 2611)

INGREDIENTES REACTIVOS:

33 mM de ácido picrico.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser una solución clara, de color amarillo. Un color naranja-rojizo o turbidez indicará deterioro.

REACTIVO DE BASE DE CREATININA - (Cat. No. 2612)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.4 M de hidróxido de sodio.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado

DETERIORO:

El reactivo debe ser una solución clara, incolora.

CALIBRADOR DE CREATININA - (Cat. No. 2613)

INGREDIENTES REACTIVOS:

Creatinina hiodroclorídrica equivalente a 5.0 mg/dL suero de creatinina.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado

DETERIORO:

El calibrador es una solución clara, incolora. La turbidez indicará deterioro.

INSTRUMENTOS

Utilice un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 510 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. EAGLE recomienda suero no hemolizado.

2. Las colecciones de orina de 24 horas deben preservarse con 15 g de ácido bórico.

3. Evite la contaminación microbiana.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

El suero de creatinina aparece estable por una semana de 2 - 8° C o tres meses de congelación.

ADITIVOS:

No se necesitan aditivos especiales o preservativos para el suero. Las muestras de orina deben conservarse con 15 g de ácido bórico.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

Young, et al (3), han revisado los efectos de medicamentos en la creatinina de suero y orina. Las muestras totalmente lipémicas o hemolizadas no deben usarse.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES PROPORCIONADOS:

REACTIVO EAGLE DE CREATININA DE ACIDO PICRICO (Cat. No. 2611 -1), REACTIVO EAGLE CREATININA BASE (Cat. No. 2612 - 1), y CALIBRADOR EAGLE DE CREATININA (Cat. No. 2613 - 1).

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS:

1. Micropipeta de 0.05 mL

2. Pipeta o dosificados de 1.0 mL

3. Incubador 37° C

CONDICIONES DE REACCION

Longitud de onda 510 nm

Tiempo de incubación 1 min.

Temp. de incubación 37° C

Volumen de la muestra 0.05 mL

Volumen de reactivo ácido picrico 0.5 mL

Volumen de reactivo base 0.5 mL

Volumen Total 1.05 mL

DESEMPEÑO DE LA PRUEBA

PREPARACION DE REACTIVO DE TRABAJO:

Prepare el reactivo de trabajo al agregar una parte de reactivo de ácido picrico a una parte de reactivo de base y mezcle bien. Este reactivo de trabajo es estable por 8 horas a temperatura ambiente.

NOTA: Diluya las muestras de orina X 10 con agua destilada antes del ensayo.

1. Marque una serie de tubos CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA 1, etc.

2. Coloque 1.0 mL de reactivo de trabajo en cada tubo. (Alternativamente, agregue 0.5 mL de reactivo de ácido picrico y 0.5 mL de reactivo base a cada tubo.)

3. Precaliente los tubos con reactivo a 37° C.

4. Ajuste el instrumento a cero de absorbencia a 510 nm con agua destilada.

5. Para cada muestra (Calibrador, Control, Desconocido) realice lo siguiente:

a. Agregue 0.05 mL de muestra en el tubo adecuado y mezcle bien.

b. Incube a 37° C durante 20 segundos y lea la absorbencia (A1).

c. Incube a 37° C por 60 segundos adicionales y lea la absorbencia (A2).

CALIBRACION:

EAGLE recomienda el uso del CALIBRADOR EAGLE DE CREATININA (Cat. No. 2613) la linearidad se extiende a 20 mg/dL de creatinina.

CONTROL DE CALIDAD:

La veracidad de los resultados de prueba debe monitorearse rutinariamente usando materiales apropiados de control de calidad normales y anormales analizados de la misma manera que los Desconocidos.

CALCULO DE RESULTADOS

Las siguientes ecuaciones se usan para determinar valores desconocidos:

SUERO CONC. DESC. =

(A2 - A1) DESC.

---------------------- X CAL. CONC. (mg/dL)

(A2 - A1) CAL.

EJEMPLO:

Un Calibrador de 5.0 mg/dL tuvo A2 - A1 = 0.120 mientras que el desconocido tuvo A2 - A1 = 0.147. La concentración de creatinina del desconocido es:

0.147

-------- X 5.0 mg/dL = 6.1 mg/dL

0.120

CREATININA DE ORINA (g/24 horas) =

(A2 - A1) DESC.

----------------------- X CAL. CONC. (mg/dL)

(A2 - A1) CAL.

X 0.01 X 10 X 24 horas volumen de orina (L)

El factor 0.01 convierte mg/dL a g/L mientras que el factor 10 ajusta para la dilución de orina antes del ensayo.

EJEMPLO:

La orina diluida 10 X tuvo A2 - A1 = 0.149 y la colección de orina de 24 horas a un volumen = 1800 mL. La creatinina excretada es:

0.149

------- X 5.0 mg/dL X 0.01 X 10 X 1.8 L/24 horas.

0.120

= 1.12 g/24 horas.

DEPURACION DE CREATININA

Depuración de creatinina =

Conc. de orina mg/dL

---------------------------- X Volumen de la orina mL/min.

Conc. de suero

EJEMPLO:

Conc. en orina =

0.149

-------- X 5.0 mg/dL X 10 = 62.1 mg/dL

0.120

VOLUMEN DE ORINA = 1800 mL/1440 min. = 1.25 mL/min.

CONCENTRACION DE SUERO = 6.1 mg/dL

62.1 mg/dL X 1.25 mL/min.

------------------------------------- = 13 mL/min.

6.1/dL

VALORES ESPERADOS

SUERO: 0.5 - 1.6 mg/dL

ORINA: 0.6 - 1.6 g/24 horas

DEPURACION DE CREATININA

HOMBRES: 105 ± 20 mL/min.

MUJERES: 95 ± 20 mL/min.

CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO

PRECISION:

El control normal y anormal de suero fue ensayado 20 veces cada uno para establecer dentro de la precisión de ensayo y para 10 días de trabajo para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

MEDIA / DESV.STA. / %CV

UN SOLO ENSAYO

Normal 1.3 / 0.04 / 3.1

Anormal 5.2 / 0.03 / 0.6

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 1.4 / 0.6 / 4.3

Anormal 5.1 / 0.04 / 0.8

ESPECIFICIDAD:

La comparación del PROCEDIMIENTO EAGLE DE CREATININA CINETICA con otro método ampliamente usado mostró una correlación de 98% con 42 muestras de suero en la variación normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

EL PROCEDIMIENTO EAGLE DE CREATININA CINETICA tiene una sensibilidad de 0.042 mg/dL por 0.001 unidades de absorbencia

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd. ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1982, p. 994.

2. Slot, C., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 17, 381 (1965)

3. Young, D.S., Pestaner, L.C., y Gibberman, V., Clin. Chem. 21, 286 D (1975)