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CREATININA (DIRECTA) PROCEDIMIENTO
Metodo para la Determinacion de Creatinina en Suero y en Orina
 
 

SUMARIO Y EXPLICACION

La creatinina es el producto final del metabolismo que ocurre principalmente en el músculo esquelético. La creatinina se filtra a nivel celular y no es reabsorbida a nivel tubular, su nivel en suero nos da un índice de la función renal.

Para la determinación de creatinina usualmente se utiliza la reacción de Jaffe o una de sus muchas modificaciones. El procedimiento de Eagle está basado en la modificación de Heinegard y Tiderstrom de la reacción de Jaffe, en la cual un surfactante económico ha sido usado para reducir la interferencia de proteína y glucosa.

PRINCIPIO

En la reacción de Jaffe, la creatinina reacciona con el ácido pícrico bajo condiciones alcalinas para formarse un complejo rojo que puede ser medido a 510 nm. El color rojo es directamente proporcional a la concentración de creatinina.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Equipo Reactivos Cat. No. 2600 incluye:

REACTIVO DE ACIDO PICRICO PARA CREATININA - (Cat No. 2601)

INGREDIENTES REACTIVOS:

3.3 ml de ácido pícrico.

PRECAUCION:

Causa irritación. Evítese contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contactos, lávese con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15-30ºC. Estable hasta la fecha de caducidad, si el frasco está bien cerrado.

DETERIORACION:

El reactivo debe ser claro, una solución amarilla. Una coloración anaranjada roja y/o turbia indica deterioro.

REACTIVO DE CREATINA BASE - (Cat. No. 2602)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.17 M. hidróxido de sodio y 26 mg de tetraborato de sodio, surfactante adicionado.

PRECAUCIONES:

Causa irritación, evítese el contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contacto lávese con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15-30ºC. Estable hasta la fecha de caducidad si el frasco está bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser claro, sin color. NOTA: Bajo condiciones frías, un precipitado blanco se puede formar. Caliente a 37ºC. y mezcle hasta que se redisuelva completamente.

CALIBRADOR DE CREATININA - (Cat No. 2603)

INGREDIENTES REACTIVOS:

Hidrocloruro de creatinina equivalente a 6.0 mg/dl de creatinina sérica.

PRECAUCIONES:

Causa irritación evítese el contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto lávese con agua abundante.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15-30ºC. Estable hasta la fecha de caducidad si el frasco está bien cerrado.

INSTRUMENTO

Use un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 510 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. Se recomienda el uso de suero no hemolizado.

2. La orina de 24 horas debe ser preservada con 15 g de ácido bórico.

3. Evítese la contaminación bacteriana.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

La creatinina del suero permanece estable por una semana a 2-8ºC. y por tres meses congelado.

ADITIVOS:

No se necesitan aditivos y preservativos especiales para el suero. La orina debe ser preservada con 15 g de ácido bórico.

SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN:

Young et al ha revisado los efectos de las drogas en la creatinina del suero y la orina. Muestras lipémicas y hemolizadas no deben ser usadas.

PROCEDIMIENTO

MATERIAL PROPORCIONADO:

Reactivo de ácido pícrico para creatinina, reactivo base para creatinina y calibrador para creatinina.

MATERIAL REQUERIDO PERO NO PROPORCIONADO:

1. Pipeteador de 0.1 ml.

2. Pipeteador de 1.5 ml.

3. Incubadora de 37ºC.

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de onda                                     510 nm

Tiempo de incubación                             15  min

Volumen de la muestra                            0.1  ml

Volumen del reactivo de ac. pícrico         1.5  ml

Volumen del reactivo base                     1.5  ml

Volumen total                                        3.1. ml

EJECUCION DEL ENSAYO:

reparación de la mezcla de trabajo; prepare la mezcla de trabajo adicionando una parte del reactivo de ácido pícrico a una parte del reactivo base y mezcle bien.

La mezcla de trabajo es estable por 8 horas a temperatura ambiente. NOTA: Diluya las muestras de orina por 10 a 1 con agua destilada antes del ensayo.

1. Etiquete a una serie de tubos como: Blanco de reactivo, calibrador, control, muestra 1, etc.

2. Agregue 3 ml. de la mezcla de trabajo en cada uno.

3. Agregue 0.1 ml de la muestra en el tubo apropiado. Use agua destilada como muestra en el blanco de reactivos.

4. Incube a 37ºC. por 15 min.

5. Calibre a cero el instrumento en 510 nm. con blancos de reactivos.

6. Lea y registre las absorbancias del calibrador, control y problemas.

NOTA: Para instrumentos de lectura directa coloque la concentración del calibrador y lea la concentración de los problemas directamente.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO FINAL DE LA REACCION:

La reacción permanece estable por 30 min. después de desarrollado el color.

CALIBRACION:

Se recomienda el uso del calibrador de creatinina que se proporciona. La linearidad de la reacción se extiende a 20 mg/dl de creatinina.

CONTROL DE CALIDAD:

La confiabilidad de los resultados han sido ensayados rutinariamente usando sueros normales y anormales, los cuales son analizados de la misma manera que los problemas.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

La siguiente ecuación es usada para determinar los valores desconocidos.

SUERO

Concentración problema =

Abs. problema

---------------------   X  Concentración del calibrador

Abs. del calibrador                            mg/dL

EJEMPLO

Un calibrador de 6.0 mg/dl tiene 0.233 de absorbancia mientras que el problema tiene 0.147. La concentración del problema es:

0.147

---------    x  6.0 mg/dl  =  3.8 mg/dL

0.233
 
 

ORINA

Creatinina en orina  (p/24 hrs)    =

Abs. problema

---------------------    x   Concentración del calibrador

Abs. calibrador                          mg/dL
 
 

X   1.67  X  0.01  X  10  X  Volumen en litros de orina de 24 horas.

El factor 1.67 corrige la diferencia de calibración que existe en el medio acuoso (orina) contra un medio proteico (suero). El factor 0.01 convierte mg/dl a g/l mientras que el factor 10 ajusta la dilucion de la orina realizada antes del ensayo.

EJEMPLO:

La orina diluída 10 x  tiene una absorbancia de 0.290 y el volumen de la orina de 24 horas es = 1800 ml. La creatinina secretada es:

0.290

--------  x    6.0 mg/dl   X   1.67   X   0.01   X   10   X  1.8 L/24 hrs.

0.233

 

=    2.24 mg/24 hrs.

DEPURACION DE CREATININA

Depuración de creatinina =

Concentración de la orina mg/dl X Vol. de la orina ml/min

Concentración del suero ( mg/dl )

EJEMPLO

 

Concentración en orina =

0.290

--------   X   6.0 mg/dlL  X  1.67   X  10

0.233

 

= 125 mg/dL

 

 

VOLUMEN DE ORINA  =   1800  ml / 1440 min.    =   1.25 ml / min.
 
 

CONCENTRACION SUERO =  3.8 mg/dl

125 mg/dl   X   1.25 ml/min

---------------------------------------    =  41 ml/min.

     3.8 mg/dl

 

VALORES NORMALES

Suero:   0.5 - 1.7 mg/dL

Orina : 0.6 - 1.6 g/24 hr.

Depuración de creatinina

Hombres:   105 + 20 ml/min.

Mujeres:       95 + 20 ml/min.
 
 

CARACTERISTICAS DE REALIZACION

PRECISION:

Sueros control normales y anormales fueron ensayados 20 veces cada uno para establecer la precisión de un solo ensayo.

MEDIA / DESV.STD / % CV

UN SOLO ENSAYO

Normal 1.3 / 0.04 / 3.1

Anormal 5.2 / 0.03 / 0.6

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 1.4 / 0.06 / 4.3

Anormal 5.1 / 0.04 / 0.8

ESPECIALIDAD:

La comparación del reactivo de CREATININA DIRECTA con otros métodos comerciales muestra el 98% correlación con 35 muestras de sueros en rangos normales y anormales.

SENSIBILIDAD:

El procedimiento de Creatinina Directa tiene una sensibilidad de 0.025 mg/dl- por 0.001 unidades de absorbancia.

REFERENCIAS

1. Tietz, NW, Fundamentos de química clínica 2nd edición, WB Sauders, C. Filadelfia 1982, p. 994.

2. Slot, C., Scand j. Clin. Lab. Invest. 17, 381 (1965).

3. Heinegrad, D., y Tiderstrom, G., Clin. Chim. Acta 43, 305 (1973).

4. Young, D.S., Pestaner, L.C,, y Gibberman, V., Química Clínica. 21 286D (1975). --------------2BBD5E2057EC Content-Type: text/html; charset=us-ascii Content-Transfer-Encoding: 7bit Content-Disposition: inline; filename="2550S.htm"