PROCEDIMIENTO DE CLORURO

Para la Determinación Cuantitativa de Cloruro en Suero y CSF

SUMARIO Y EXPLICACION

El Cloruro representa la principal unión extracelular y ayuda a balancear la neutralidad eléctrica de los fluidos del cuerpo. Juega un papel importante en el mantenimiento de la hidratación adecuada y la presión osmótica. Los valores bajos de cloruro aparecen con quemaduras excesivas, vómito, obstrucción interna, nefritis, acidez metabólica, crisis adisoniana y diarrea. El cloruro alto puede observarse en la deshidratación, hiperventilación, paro cardíaco congestivo, obtrucción urinaria y el tratamiento excesivo con cloruro (1) (5).

En 1956, Zall et al, (2) introdujo un micrométodo para la determinación del cloruro basado en el uso de compuestos de tiocianato de mercurio y compuestos ferrosos. Posteriormente, Skaggs y Hochstrasser (3) modificaron el procedimiento para el ensayo de suero de cloruro. EL PROCEDIMIENTO EAGLE DE CLORURO está basado en la modificación de Skaggs y no requiere precipitación de proteina.

PRINCIPIO

El cloruro desplaza el tiocianato de las formaciones de mercurio no ionizadas del cloruro de mercurio. El tiocianato reacciona con iones ferrosos para formar un complejo de color rojo que puede ser medido a 480 nm. La intensidad de color es proporcional a la concentración de cloruro.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego de Reactivo Cat. No. 2450 incluye:

REACTIVO DE CLORURO - (Cat. No. 2451)

INGREDIENTES REACTIVOS:

1.0 mM tiocianato de mercurio y 38 mM de nitrato ferroso en solución ácida diluida. Agregue metanol.

PRECAUCIONES:

CONTIENE MERCURIO. Puede ser dañino si se ingiere. No pipetee por la boca. Si es ingerido, realice lavado gástrico y llame al médico. Además contiene metanol. No se inhale.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese a 15-30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad. PROTEJASE CONTRA LA LUZ.

DETERIORO:

El reactivo deberá ser claro, de color amarillo pálido. La turbidez o un color rojo-café indicará deterioro y el reactivo no debe usarse.

BLANCO DE CLORURO - (Cat. No. 2452)

INGREDIENTES REACTIVOS:

25m Eq/L cloruro de sodio.

PRECAUCIONES:

No se ingiera. La toxicidad no ha sido determinada.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad.

DETERIORO:

El blanco debe ser una solución clara, incolora. La turbidez indicará deterioro y el blanco no debe ser usado.

CALIBRADOR DE CLORURO - (Cat. No. 2453)

INGREDIENTES REACTIVOS:

100 m Eq/L cloruro de sodio.

PRECAUCIONES:

No se ingiera. La toxicidad no ha sido determinada.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénese de 15 - 30° C. Es estable hasta la fecha de caducidad.

DETERIORO:

El calibrador debe ser una solución clara, incolora. La turbidez indicará deterioro y el blanco no debe ser usado.

INSTRUMENTOS

Se requiere un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 480 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. Separe el suero no hemolizado del cuágulo de sangre tan pronto como sea posible. Puede usarse plasma.

2. Las muestras hemolizadas o lipémicas no deben usarse.

3. No tome sangre de un miembro que reciba una infusión.

4. Puede usarse el fluído cerebroespinal.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

El suero de cloruro aparece estable por 7 días a 2-8° C y tres meses de congelación. Almacénese en un contenedor sellado.

ADITIVOS:

No se requieren aditivos o preservativos especiales.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

Los pacientes que reciben bromuro pueden mostrar niveles de cloruro falsamente elevados. Young et al (4) ha revisado los efectos del medicamento en el suero de cloruro.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES SUMINISTRADOS

REACTIVO DE CLORURO (Cat. No. 2451), BLANCO DE CLORURO (Cat. No. 2452), y CALIBRADOR DE CLORURO (Cat. No. 2453).

MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO:

1. 0.02 mL micropipeta

2. 4.00 mL pipeta o dosificador

3. Cronómetro

4. Tubos de cultivo y tablero

CONDICIONES DE REACCION:

Longitud de onda 480 nm

Selección de filtro 470-500 nm

Tipo de reacción Punto final

Temp. Incubación 15-30° C

Tiempo de incubación 5 minutos

Volumen de muestra 0.02 mL

Volumen de reactivo 4.00 mL

Volumen total 4.02 mL

Bajo normal 96 mEq/L

Alto normal 106 mEq/L

Valor calibrador 100 mEq/L

PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:

Refiérace a la aplicación del instrumento específico para instrucciones.

PROCEDIMIENTO MANUAL:

1. Coloque 4.00 mL del reactivo en tubos etiquetados Blanco de Cloruro, Calibrador, Control, Muestra 1, etc.

2. Coloque 0.020 mL de muestra en un tubo debidamente etiquetado.

3. Permita a las muestras de prueba permanecer a temperatura ambiente (15 - 30° C) por 5 minutos.

4. Ajuste el aparato a cero absorbencia a 480 nm usando Blanco de Cloruro.

5. Lea y registre los valores de absorbencia del Calibrador, los Controles y Desconocidos.

NOTA: Para un instrumento de lectura directa, coloque a cero con Blanco de Cloruro y coloque la lectura al valor de concentración del Calibrador. Lea las concentraciones Desconocidas directamente.

NOTA DEL PROCEDIMIENTO:

Es importante usar la SOLUCION DE BLANCO DE CLORURO como muestra para el Blanco de reactivo para corregir la linearidad limitada al usar calibración de punto.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO FINAL DE REACCION:

Las muestras deberan ser leídas dentro de 60 minutos después de desrrollado el color.

CALIBRACION:

No es necesario determinar una curva de Calibración con este procedimiento porque la reacción es lineal en una variación de 70 - 140 mEq/L. Sin embargo debe determinarse un Calibrador y Blanco de Reactivo con cada juego de Desconocidos ensayado. CALIBRADOR DE CLORURO (Cat. No. 2453) y BLANCO DE CLORURO (Cat. No. 2452) se agregan para este propósito.

CONTROL DE CALIDAD:

La veracidad de los resultados deberá ser monitoreada en forma rutinaria usando materiales apropiados de control de calidad (normales y anormales) analizados de la misma manera que los Desconocidos. EAGLE DIAGNOSTICS ofrece CHEM-TROL NORMAL (Cat. No. 8100) y CHEM-TROL ELEVADO (Cat. No. 8200) para este propósito. La falla en alcanzar los valores ensayados de suero de control fresco deberán ser profusamente investigados antes que los resultados del paciente sean reportados.

CALCULO DE RESULTADOS

Use la siguiente ecuación para obtener las concentraciones Desconocidas:

Desconocido (mEq/L) =

Abs. Desc.

-------------- X Cal. Conc. (mEq/L)

Abs. Cal.

EJEMPLO:

Un Calibrador 100 mEq/L tuvo una Abs. = 0.820 mientras la Abs. Desconocida = 0.780. La concentración de cloruro del Desconocido es:

0.780

-------- X 100 mEq/L = 95 mEq/L

0.820

LIMITACIONES

1. Tenga precaución de no tocar la punta de la pipeta con los dedos pues puede contaminarse el cloruro.

2. La exposición de las muestras o el reactivo a los vapores de ácido hidroclorídrico pueden ocasionar resultados elevados.

VALORES ESPERADOS (5)

96 - 106 mEq/L

CSF (Adulto) 118 - 132 mEq/L

CSF (Niño) 110 - 130 mEq/L

Este intervalo representa el 95% de confianza obtenido de pacientes clinicamente normales. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia.

CARACTERISTICAS DE REALIZACION

LINEARIDAD:

Este método es lineal en una variación de 70 - 140 mEq/L.

PRECISION:

Dentro del ensayo; controles normales y anormales fueron ensayados 20 veces cada uno para establecer la precisión dentro del ensayo.

MEDIA / DESV. STD. / CV%

Normal 103.6 / 1.47 / 1.42

Anormal 113.5 / 1.20 / 1.05

De ensayo a ensayo; sueros de control normal fueron ensayados durante 10 días de trabajo para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

Normal 103.7 / 1.42 / 1.37

Anormal 113.1 / 1.49 / 1.31

ESPECIFICIDAD:

Una comparación de este PROCEDIMIENTO DE CLORURO con otro método comercial ampliamente utilizado mostró una correlación de 97% en el intervalo normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

Este PROCEDIMIENTO DE CLORURO tiene una sensibilidad de 0.12 mEq/L por 0.001 unidades de absorbencia.

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd. ed, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1986, p. 1183.

2. Zall, D.M., Fisher, D., y Garner, M.Q., Anal. Chem. 10,918 (1964).

3. Skeggs, L.T., y Hochstrasser, H.C., Clin. Chem. 10, 918 (1964).

4. Young, D.S., Pestaner, L.C. y Gibberman, V., Clin. Chem., Vol. 21, p. 277 D(1975).

5. Tietz, N.W., Clinical Guide to Laboratory Test, 2nd. ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia 1990, p.118.