PROCEDIMIENTO DE CALCIO (CPC)

Para la Determinación Cuantitativa de Calcio en Suero y Orina

SUMARIO Y EXPLICACION

El calcio en el suero se distribuye en partes iguales como forma ionizada y la forma unida a proteína no ionizada. La forma ionizada juega un papel activo en la congelación sanguínea y activación de las enzimas. Los incrementos de calcio ocurren en hiperparatiroidismo, mielma múltiple y neoplasis de huesos. El hipoparatiroidismo, nefrosis, estentórea y Rickets disminuyen el calcio sérico. Una relación recíproca parece existir entre el calcio y el fósforo sérico. Cuando uno aumenta, el otro usualmente disminuye (1).

Mientras diferentes metodologías han sido introducidas para el ensayo del calcio, el que ofrece máxima sensibilidad y especificidad con fácil manejo involucra el uso de o-cresolftaleína complexona para unir al calcio (2). El procedimiento EAGLE DE CALCIO está basado en la modificación de este método. Un acelerador de reacción ha sido incluido para asegurar que la reacción se complete en menos de un minuto.

PRINCIPIOS

La o-Cresolftaleína complexona se une al calcio en medio alcalino para formar una coloración púrpura la cual absorbe al máximo a 570nm. La interferencia por el magnesio es minimizada por la adición de 8-hidroxiquinoleína. Los estabilizadores son añadidos para disminuir la absorbancia del blanco y aumentar la estabilidad del reactivo de trabajo. Un acelerador de reacción es incluido para asegurar que la reacción se complete en menos de un minuto.

REACTIVOS  PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

El Juego de Reactivos Cat. No. 2400 incluye:

REACTIVO DE COLOR PARA CALCIO - (Cat. No. 2401)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.082mM o-cresolftaleína complexona y 17.2mM 8-hidroxiquinoleína. Estabilizador y acelerador de reacción añadidos.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto lávese con abundante agua.

ALMACEN Y ESTABILIDAD:

Estable a 15-30ºC hasta la fecha de caducidad si está bien cerrado. PROTEJASE DE LA LUZ.

DETERIORO:

El reactivo deberá ser una solución amarilla clara. La turbidez o un color obscuro puede indicar deterioro. El blanco de reactivo en REALIZACION DE LA PRUEBA deberá tener una absorbancia de menos de 0.250 a 570nm.

REACTIVO CALCIO BASE - (Cat. No. 2402)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.51 M dietilamina y 7.7 mM de cianuro de potasio.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evítese el contacto con ojos, piel y ropa. En caso de contacto lávese con abundante agua. Contiene cianuro no se mezcle con ácido.

ALMACEN Y ESTABILIDAD:

Almacénese a 15-30ºC. Estable hasta la fecha de caducidad si está bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser una solución clara e incolora. La turbidez indica deterioro.

CALIBRADOR DE CALCIO - (Cat. No. 2403)

INGREDIENTES DEL REACTIVO:

10.0 mg/dl de Carbonato de calcio en dilución con ácido clorhídrico.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite el contacto con ojos piel y ropa. En caso de contacto lave con abundante agua.

ESTABILIDAD Y ALMACEN:

Almacénese a 15-30ºC. Estable hasta la fecha de caducidad estando bien cerrado.

DETERIORO:

El calibrador es una solución clara e incolora. La turbidez indica deterioro.

INSTRUMENTOS

Use un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 570nm.

RECOLECCION DEL ESPECIMEN

1. Eagle recomienda el uso de suero separado del coágulo tan pronto come sea posible. El plasma heparinizado puede ser empleado también.

2. El contacto prolongado del suero con el coágulo puede llevar a  falsos resultados bajos.

3. El EDTA, citrato y oxalato unen al calcio y no deberán ser usados.

4. La hemólisis abundante o muestras lipémicas no deberán ser usadas.

5. La orina puede ser analizada por este método.

ALMACEN DE LA MUESTRA:

El calcio parece ser estable en el suero u orina por una semana a 2-8ºC y hasta un año congelado.

ADITIVOS:

No se requiere de aditivos o preservativos especiales para el suero. Una alicuota de recolección de orina deberá ser acidificada a pH=4 con ácido clorhídrico concentrado antes de analizarse. Mezcle bien la orina antes de muestrear para asegurar la formación de una suspensión uniforme si se precipitó algo de calcio.

SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN:

Los especímenes de pacientes que reciben EDTA o bromosulfoftaleína (BSP) no deberán ser usados. Young et al (3) ha revisado los efectos de los medicamentos en el calcio sérico y urinario.

PROCEDIMIENTO

MATERIAL NECESARIO, PERO NO INCLUIDO

1. Micropipeta de 0.01 ml

2. Pipeteador de 0.5 y 1.0 ml

3. Tubos de cultivo/reloj marcador de minutos, etc.

CONDICIONES DE REACCION

Longitud de onda 570 nm

Tipo de reacción punto final

Temperatura de incubación 15-30ºC

Tiempo de incubación 1 minuto

Volumen de muestra 0.01 ml

Volumen de Reactivo color 0.5 ml

Volumen de reactivo base 0.5 ml

Volumen total 1.01 ml

Valor normal bajo 8.5 mg/dl

Valor normal alto 11.0 mg/dl

Valor calibrador 10.0 mg/dl

PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO:

Use un recipiente de plástico o uno de vidrio lavado con ácido. Añada una parte de reactivo color a una parte de reactivo base. Mezcle por rotación. Uselo antes de una hora de preparado.  El reactivo de trabajo contiene una pequeña cantidad de cianuro y no deberá ser mezclado con ácido. Deséchelo con abundante agua.

REALIZACION DE PRUEBA:

1. Coloque 1.0 ml del reactivo de trabajo dentro de tubos marcados como Blanco, calibrador, problema, control, etc.

2. Coloque 0.01 ml del espécimen en el tubo apropiado. Mezcle bien. Use agua destilada como espécimen para el blanco. Diluya las muestras de orina 1:2 con DH2O

3. Déjelos reposar a temperatura ambiente por 1 minuto.

4. Ajuste el instrumento a cero con el blanco de reactivos a 570nm.

5. Lea y registre las absorbancias de los problemas y calibrador.

NOTA: Para aparatos de lectura directa coloque la lectura a la concentración del calibrador y lea directamente las concentraciones de los problemas directamente de la pantalla.

NOTA DEL PROCEDIMIENTO:

La  linearidad se extiende hasta 15mg/dl. los especímenes que exceden este valor deberán ser diluidos con solución 0.9% de cloruro de sodio y reensayados. Multiplique el resultado por el factor de dilución para obtener la respuesta final.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO FINAL DE REACCION:

Las muestras deberán ser leídas antes de 15 minutos de desarrollado el color.

LINEARIDAD:

0.5 a 15 mg/dL

CONTROL DE CALIDAD:

EAGLE recomienda el uso de materiales apropiados de control de calidad (normal y anormal) y analizados de la misma manera que los problemas.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

La siguiente ecuación es usada para determinar la concentración de los problemas:

SUERO

Problema (mg/dL) =                                              

Abl. problema

---------------------  X Conc. Calibrador (mg/dl)

Abs. Calibrador

ORINA

Problema (mg/24 hrs.) =

Abs. Problema

--------------------- X Conc. Calibrador x 2 x 10 dl/L

Abs. Calibrador

x Volumen de la orina ( L/24 Hrs.)

El factor x 2 corrige la dilución de la muestra durante el ensayo y el factor x10 convierte de mg/dl a mg/L.

LIMITACIONES

Los recipientes de plástico o lavados con ácido deberán ser los empleados para la preparación de el reactivo de trabajo.

VALORES DE REFERENCIA

SUERO   8.5-11.0 mg/dl

ORINA    50-150 mg/24 hr

Este intervalo representa el intervalo de confianza del 95% para 23 especímenes obtenidos de una problación clínicamente normal. Eagle recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia.

CARACTERISTICAS DE REALIZACION

PRECISION:

Dentro del ensayo; sueros control normal y anormal fueron ensayados 20 veces para establecer la precisión dentro del ensayo.

MEDIA / DEV. STD. /  %CV

NORMAL 10.7 / 0.12 / 1.1

ANORMAL 8.1 / 0.11 / 1.4

ESPECIFICIDAD:

Una comparación del METODO EAGLE DE CALCIO con otro ampliamente usado arrojó un 99% de correlación con 23 muestras de suero en los intervalos normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

El método EAGLE para Calcio tiene una sensibilidad de 0.02 mg/dl por 0.001 unidades de absorbancia.

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentos de Química Clínica, 2nd Edición W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1976, p. 901.

2. Beginski, E.S., Marie, S.S., Clark, W.L., y Zak, B., Clínica Química. Acta 46,49 (1973).

3. Young, D.S., Pestaner, L.C. y Gibberman, V., Clínica Química. 21 272D (1975).