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PROCEDIMIENTO DE ALBUMINA BCP

Para la Determinación Cuantitativa de Albumina en Suero Humano por el Método Púrpura Bromcresol



SUMARIO Y EXPLICACION

La albumina es la más abundante de las proteínas en el suero. Su importancia en las funciones del cuerpo radica en su habilidad de actuar como portador de sustancias tales como medicamentos, antibióticos, bilirrubina y ácidos grasos (1). La albumina también ayuida amantener  la presión osmótica del cuerpo  y sirve como almacén de proteínas estructurales que se usan para crecimiento de tejido.  La disminución de los niveles de albumina en suero ocurren comúnmente  en  una variedad de enfermedades tales como síndrome nefrótico, enfermedades hepáticas, infecciones agudas y malnutrición, haciendo de primordial relevancia la determinación exacta de albúmina.

Muchos métodos se han descrito para determinar la albumina de suero. En 1965, Rodkey  (2) introdujo  un método simple de ligadura de teñido basado en la reacción de albumina  con el verde bromcresol (BCG). El método  BCG se utiliza ampliamente  y muchas modificaciones  se han descrito.  Recientemente,  después de muchos estudios intensivos,  las deficiencias en la metodología BCG se han hecho evidentes.  El método BCG  sobre estima la concentración de albumina en el sueroa casusa de su reacción no específica  con otras proteínas de suero, reaccionando rápidamente con la albúmina  y luego más lentamente con ceruloplsamin, componente C3 de complemento, haptoglobina y transferrina, (3). Esta reacción no específica conduce a una pobre relación  de métodos para BCG con el procedimiento de referencia  de inmunoelectroforesis.  (4=. En consecuencia, el Panel Experto de Proteínas ha recomendado que los métodos de BCG deben usarse solamente para propósitos de filtración (5).

En 1968, Louderback (6) introdujo un método para albumina basado en la reacción con bromcresol púrpura (BCP). El BCP es específico para la albumina humana y liga instantáneamente sin aumento en color al  estar fijo. El método BCP también muestra un acuerdo excelente con electroinmunoensayo {Y (BCP) = 0.95 X (EIA) + 1.72} (6). En un estudio realizado por Walsh (7), Se notó que el método BCP correlacionó muy bien con los procedimientos inmunoquímicos mientras que ningún método BCP se comparó favorablemente con esta técnica de referencia. Cuando se considera el costo y manejo, el método BCP se recomienda ampliamente (7).

PRINCIPIO

EL PROCEDIMIENTO EAGLE DE ALBUMINA BCP se basa en las capacidades de ligamento-tintura de albumina de suero con bromcresol púrpura. La absorbencia a 300 nm de bromcresol púrpura aumenta al ligarse a la albumina y es proporcional a la concentración de albumina presente.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Juego de Reactivo Cat. No. 2070 incluye:

REACTIVO ALBUMINA BCP - (Cat. No. 2071)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.08 mM púrpura bromcresol amortiguado a pH = 4.9. Agentes antimicrobianos y sufractantes agregados.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene de 15º - 30º C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se conserva bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser una solución clara amarillo - verde. La turbidez o presencia de precipitados indicará deterioro.

CALIBRADOR DE ALBUMINA - (Cat. No. 2072)

INGREDIENTES REACTIVOS:

Albumina humana en salina. Preservativo agregado. Consulte la etiqueta del frasco para el valor asignado.

PRECAUCIONES:

No pipetee con la boca.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacénece de 15º - 30º C. Despues de abrir el frasco, almacene de 2º - 8º C. Es estable hasta la fecha de caducidad si esta bien cerrado.

DETERIORO:

La turbidez indicará deterioro.

INSTRUMENTOS

Utilice un espectrofotómetro o colorímetro adecuado calibrado a 600 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. El suero es la muestra de elección.

2. Evite la hemolisis excesiva.

3. Las muestras altamente ictéricas, hemolizadas y lipémicas requieren blanco de suero.

4. Evite la venostasis en la colección de la muestra porque las hemoconcentraciones aumentarán las concentraciones aparentes de albumina.

ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

La albumina es estable por una semana a 25º C o por un mes a 4º C (8). Evite la contaminación microbiana.

ADITIVOS:

No se requieren aditivos o preservativos especiales.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

Young et al (9) han revisado los efectos de medicamentos en los niveles de suero de albumina.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES PROPORCIONADOS:

REACTIVO DE ALBUMINA BCP (Cat. No. 2071) y CALIBRADOR DE ALBUMINA (Cat. No. 2072).

MATERIALES REQUERIDOS PERO  NO SUMINISTRADOS:

1. Micropipeta 0.01 mL

2. Pipeta o dosificador de 1.0 mL

3. Tubos de ensayo y tablero

4. Cronómetro

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de Onda 600 nm

Selección de Filtro 580 - 620

Tipo de Reacción Punto Final

Temperatura de Incubación 15º - 30º C

Tiempo de Incubación 5 minutos

Volumen de la Muestra 0.01 mL

Volumen de Reactivo 1.0 mL

Volumen Total 1.01 mL

Bajo Normal 3.5 g/d

Alto Normal 5.0 g/dL

Valor de Calibrador Ver etiqueta del frasco

PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:

Refiérace a la aplicación específica del instrumento para instrucciones.

PROCEDIMIENTO MANUAL:

NOTA DE PROCEDIMIENTO: Para instrumentos que requieren un volumen total de 1.0 mL, aumente el volumen del REACTIVO DE ALBUMINA BCP a 2.0 mL y el volumen de la muestra a 2.02 mL proceda como se indica.

1. Coloque 1.0 mL de REACTIVO DE ALBUMINA BCP en los tubos etiquetados: Blanco, Calibrador, Control, Muestra 1, etc.

2. Coloque 0.01 mL de la muestra en un tubo propiamente etiquetado. Mezcle bien. Use agua desionizada como muestra para blanco de reactivo.

3. Permita que las muestras de prueba estén a temperatura ambiente (15º - 30º C) por un minuto.

4. Ajuste el instrumento a cero absorbencia a 600 nm usando blanco de reactivo.

5. Lea y registre los valores de absorbencia para Calibrador, Controles y Desconocidos.

NOTA: Para una lectura directa del instrumento, ponga a cero con Blanco de reactivo y ponga la lectura a la concentración del Calibrador. Lea la concentración Desconocida directamente.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO DE REACCION FINAL:

El color final es estable por un mínimo de 60 minutos.

BLANCO DE SUERO:

Las muestras altamente ictericas, hemolizadas y lipémicas requieren corrección de blanco.

1. Coloque 1.0 mL de 0.9 % de solución de Cloruro de Sodio en un tubo.

2. Agregue 0.01 mL Muestra. Mezcle bien.

3. Instrumento cero a 600 nm con 0.9 % de solución de Cloruro de Sodio.

4. Lea y registre las absorbencias del Blanco de suero.

5. Sustraiga la absorbencia de Blanco de suero de la absorbencia Desconocida obtenida en el paso 5 del desempeño de la prueba. Use este valor al calcular la concentración Desconocida.

CALIBRACION:

No es necesario determinar una curva de calibración para este procedimiento ya que la reacción es lineal en la variación de 0.5 - 8.0 g/dL suero de albumina. Sin embargo, un Calibrador y Blanco de reactivo deben determinarse con cada juego de Desconocidos ensayados. Use el Calibrador de Albumina que se proporciona en el juego del reactivo para este propósito.

CONTROL DE CALIDAD:

La confiabilidad de los resultados de la prueba debe monitorearse rutinariamente usando materiales de control de calidad adecuados (normal y anormal) analizados en la misma forma que los Desconocidos. EAGLE DIAGNOSTICS ofrece CHEM TROL NORMAL (Cat. No. 8100) y CHEM TROL ELEVADO (Cat. No. 8200) para este propósito. La falla en alcanzar los valores ensayados de controles de sueros preparados frescos deberá ser ampliamente investigada antes que se reporten los valores del paciente.

CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación es utilizada para determinar la concentración de Desconocidos:

Desconocidos (g/dL)  =

Abs. Desc.

--------------- X  Cal. Conc. (g/dL)

Abs. Cal.

EJEMPLO:

Un Calibrador de 4.0 g/dL tuvo una Abs. de 0.471 mientras la Abs. Desc. = 0.508. La concentración de albumina del Desconocido es:

0.508

---------  X  4.0  =  4.3 g/dL

0.471

LIMITACIONES

Los Calibradores y Controles que contienen albumina humana deben usarse con este método ya que las propiedades de ligadura de teñido difieren entre las especies.

VALORES ESPERADOS 3.5 - 5.0 g/dL

Esta variación representa el 95% de intervalo de confiabilidad obtenido de una población clinicamente normal. Cada laboratorio debe establecer su propia variación de valores esperados.

CARACTERISTICAS DEL DESEMPEÑO

LINEARIDAD:

La reacción es lineal en la variación de 5.0 - 8.0 g/dL.

PRECISION:

Dentro del ensayo - Suero normal y anormal fue ensayado 20 veces para la precisión dentro del ensayo.

MEDIA / DESV. STD. / % CV

Normal 4.24 / 0.076 / 1.80

Anormal 3.02 / 0.056 / 1.86

De ensayo a ensayo - suero normal y anormal fue ensayado por 10 dias para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

Normal 4.31 / 0.104 / 2.41

Anormal 3.09 / 0.061 / 1.97

ESPECIFICIDAD:

Ha sido bien establecido que los métodos BCP son mas específicos para la albumina humana que los métodos BCG (3,5,6). Para establecer lo que debe esperar un laboratorio al comparar el método EAGLE a su método BCG, se hizo una comparación con un método comercial BCG ampliamente usado. Los resultados mostraron una correlación de 98.6 % para 20 muestras en la variación normal y anormal, donde y (BCP) = 1.061 X (BCG) - 0.448.

SENSIBILIDAD:

Este PROCEDIMIENTO DE ALBUMINA BCP tiene una sensibilidad de 0.01 g/dL por 0.001 unidades de absorbencia.

REFERENCIAS

1. Lynch, M. J. Medical Laboratory Techology and Clinical Pathology, 2nd. Ed. W.B Saunders Co. Philadelphia, 1969 p. 219.

2. Rodkey. F.L. Clin. Chem. 11, 478 (1965)

3. Duggan J. and Duggan P. F. Clin. Chem. 28, 1407 (1982)

4. Webster, D.Bignell A. H. C. y Attwood, E.C. Clin. Chem. Acta 55, 101 (1974)

5. Pinnell, A.E. y Northam, B. E. Clin. Chem. 24, 80 (1978)

6. Louderback, A. Mealy, E.H. y Taylor N.A. Clin. Chem. 14, 793 (1968)

7. Walsh, R. L. Clin. Biochem. 16, 178 (1983)

8. Henry, R.J Clinical Chemistry Principles and Technics 2nd. Ed. Harper and Row, Hagerstown, 1974 p. 413.

9. Young, D.S Pestaner. L. C. y Gibberman, V. Clin. Chem. 21, 244 D 1975).