PROCEDIMIENTO DE ALBUMINA METODO BCG

Para la Determinación de Albúmina Sérica por el Método BCG (Bromo Cresol Verde)

SUMARIO Y EXPLICACION

La albúmina es la más abundante de las proteínas séricas. Su importancia en el funcionamiento del cuerpo es la habilidad para transportar substancias tales como medicamentos, antibióticos, bilirrubina y ácidos y sirve como almacén de proteínas de estructura necesarias para el crecimiento de los tejidos. Los niveles bajos de albúmina ocurren comúnmente en una variedad de enfermedades tales como el síndrome nefrítico, enfermedades hepáticas, infecciones agudas y mala nutrición haciendo así a las determinaciones de albúmina de primordial importancia. Muchos métodos han sido descritos para determinar a la albúmina sérica. En 1965 Rodkey (2) introdujo un método simple basado en la unión de colorantes. La reacción de la albúmina con el verde de bromo cresol es ampliamente usado y varias modificaciones se han descrito. (3).

PRINCIPIO

Este procedimiento está basado en las propiedades de albúmina sérica de copularse con colorantes, en este caso con el BCG. La absorbancia de BCG a 630 nm incrementa al unirse con la albúmina y es proporcional a la concentración de albúmina presente en el suero.

REACTIVOS PARA USO DIAGNOSTICO IN-VITRO

Equipos Reactivos Cat. No. 2050 incluye:

REACTIVO BCG PARA ALBUMINA - (Cat. No. 2051)

INGREDIENTES:  

0.066 mM de verde de bromocresol en tampón a pH 4.2. Surfactante y antimicrobianos incluidos.

PRECAUCIONES:

Causa irritación. Evite el contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACEN Y ESTABILIDAD:

Almacénese a 15-30ºC. Es estable hasta la fecha de caducidad si está bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo deberá ser una solución clara amarillo verdosa. La turbidez indica deterioro.

CALIBRADOR DE ALBUMINA BCG - (Cat. No. 2072)

INGREDIENTES:

Albúmina humana en solución salina. Preservativos incluidos. Reconstituya con 2.0 mL de agua destilada. Consulte la etiqueta para el valor asignado.

PRECAUCIONES:

No se ingiera.

ALMACEN Y ESTABILIDAD:

Almacénese a 15-30ºC. Después de reconstituido, guarde a 2-8ºC. Es estable hasta la fecha de caducidad si está bien cerrado.

DETERIORO:

La aparición de turbidez indica deterioro.

INSTRUMENTOS

Se requiere de un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 630 nm.

RECOLECCION DEL ESPECIMEN

PRECAUCIONES

1. Se recomienda el uso de suero como muestra de elección.

2. Evite hemólisis abundante.

3. Sustancias que causan interferencia: Muestras elevadamente ictéricas, considerablemente hemolizadas y lipémicas requieren corrección de blanco (ver BLANCO DE SUERO).

ALMACEN DE LA MUESTRA:

La albúmina es estable por una semana a 25ºC o un mes a 4ºC (4). Evite la contaminación microbiana.

ADITIVOS:

No se requiere de aditivos especiales o preservativos.Young et al (5) revisó los efectos de medicamentos en la albúmina sérica.

PROCEDIMIENTO

MATERIAL NECESARIO (PERO NO SUMINISTRADO):

1. Micropipeta de 0.01 ml o micropipeteador de 0.01 ml

2. Pipeta de 1.0 ml o dosificador de 1.0 ml

3. Tubos de cultivo/reloj marcador de minutos

CONDICIONES DE REACCION:

Longitud de onda 630nm

Tipo de reacción Punto final

Temp de incubación 15-30ºC

Tiempo de incubación 5 min.

Volumen de muestra 0.01 ml

Volumen de reactivo 1.00 ml

Volumen total 1.01 ml

Intervalo normal 3.5-6.0 g/dl

Valor del calibrador 4.0 g/dl

REALIZACION DE LA PRUEBA:

1. Coloque 1.0 ml de reactivo de albúmina BCG dentro de tubos etiquetados como BLANCO, CALIBRADOR, MUESTRA, CONTROL etc.

2. Coloque 0.01 ml de la muestra en un tubo apropiadamente etiquetado, mezcle bien y use agua desionizada para el blanco de reactivo.

3. Dejar temperatura ambiente durante 5 min.

4. Ajuste a cero de absorbancia a 630 nm con blanco de reactivo.

5. Lea registre las absorbancias para el calibrador control y problemas.

NOTA: Para aparatos con lectura directa coloque el valor del calibrador en la pantalla y lea las muestras subsecuentes directamente.

ESTABILIDAD DEL PRODUCTO FINAL DE REACCION:

El color final es estable 60min. Después de desarrollado el color.

BLANCO DE SUERO:

Las muestras lipémicas, ictéricas o hemolizadas requieren blanco de muestra.

1. Coloque 1 ml de solución de cloruro de sodio al 0.9 % en un tubo.

2. Agregue 0.01 ml de muestra y mezcle bien.

3. Ajuste a cero a 630 nm con solución de cloruro de sodio 0.9 %.

4. Lea y registre la absorbancia del blanco de suero.

5. Reste la absorbancia del blanco de suero de la absorbancia de la muestra en el paso 5 de realización de la prueba. Usese este valor en el cálculo de la concentración de los problemas.

LINEARIDAD:

La linearidad se extiende de 0.5 a 6 g/dl, no es necesario hacer curva de calibración.  Utilice el calibrador de albúmina (Cat. 2072) y el blanco de muestra.

CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación es empleada para calcular la concentración de los desconocidos.

MUESTRA g/dL =

ABS. MUESTRA   

-------------------------- X VALOR CALIBRADOR  (g/dL)

ABS. CALIBRADOR

LIMITACIONES

Los calibradores y controles usados en esta técnica deberán contener albúmina humana ya que las propiedades de unión a colorantes varían entre las diferentes especies animales.

VALORES DE REFERENCIA       

3.5  a  5.5  g/dL

Este intervalo representa el 95% de confianza para 38 muestras obtenidas de personas clínicamente sanas. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERISTICAS DE REALIZACION

PRECISION:

Sueros normales y anormales fueron ensayados 20 veces para establecer la precisión dentro del mismo ensayo y durante 10 días para establecer la precisión de ensayo a ensayo.

MEDIA / DEV. STD. / %CV

DENTRO DEL ENSAYO

Normal 4.05 / 0.065 / 1.60

Anormal 2.91 / 0.054 / 1.86

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 4.11 / 0.104 / 2.53

Anormal 3.00 / 0.068 / 2.27

ESPECIFICIDAD:

Un estudio comparativo fue realizado usando un método ampliamente aceptado comercialmente. Los resultados mostraron un 98% de correlación para 28 muestras dentro de los intervalos normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

Este método tiene una sensibilidad de 0.017 g/dL por 0.001 unidades de absorbancia.

REFERENCIAS

1. Lynch, M.J., Medical Lab. Tech. and Clin. Path. 2nd. ed. W.B.Saunders Co. Philadelphia, p.219 (1969).

2. Rodkey, F.L., Clin. Chem. 11, p.487 (1965).

3. Doumas, B.T., Watson, W.A. and Biggs, H.G., Clin. Chem. Acta 31 87 (1971).

4. Henry, R.J., Clin.Chem. Principles and Techniques, 2nd ed., Harper and Row, Hagerstown, p.413 (1974).

5. Young, D.S.,Pestaner, L.C. y Gibberman, V.,Clin. Chem. 21 p244D (1975).

6. Spencer, K. y Price, C.P., Anals Clin. Biochem 14, p.105 (1977).

7. Tiets, N.W., Textbook of Clin.Chem., W.B.Saunders Co.,Philadelphia. 26,(1956).

8. Tietz, N.W., Fundamentals of Clin. Chem., 2nd. ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.589 (1986).