PROCEDIMIENTO (TPTZ) DE ACIDO URICO

Para la Determinación Cuantitativa del acido Urico en suero

SUMARIO Y EXPLICACION

El Acido Urico del suero es el producto final del metabolismo de las purinas en los tejidos y es eliminado a través de los riñones por filtración celular (1). Altos niveles de Acido Urico son el resultado de enfermedades como Leucemia, Polisitema, la ingestión de comidas ricas en núcleo-proteínas (p.ej., hígado y riñón) o cuando la función renal está deteriorada. La gota resulta del depósito de Acido Urico en las articulaciones.

El Acido Urico ha sido ensayado por una variedad de procedimientos incluyendo la reducción del ácido fosfotúngstico (2), y por la medición directa a 293 nm antes y después del tratamiento con uricasa (3). Los productos del reactivo de uricasa han sido usados también como base para las determinaciones del ácido urico (4,5). El método del ácido fosfotúngstico carece de especificidad y los procedimientos de uricasa son laboriosos e insensibles.

El PROCEDIMIENTO EAGLE (TPTZ) DE ACIDO URICO emplea el método de reducción férrica propuesto por Morin (6,7). Este método ofrece una determinación sensible y rápida del ácido urico en el cual la interferencia es mínima.

PRINCIPIO

Una mole de ácido urico reduce cuatro moles de iones ferricos a la forma ferrosa. 2,4, 6 - tripyridyl -triazine (TPTZ) reacciona con los iones ferrosos para formar un complejo en color azul el cual absorbe fuertemente a 590 nm.

REACTIVOS: PARA USO DIAGNOSTICO IN - VITRO

Reactivo Set Cat. No. 1200 incluye:

REACTIVO AMORTIGUADO - FERRICO - (Cat. No. 1201)

INGREDIENTES REACTIVOS:

0.66 mM iones ferricos en acetatto amortiguado (pH = 4.65). Incluye estabilizadores.

PRECAUCIONES:

No ingerir. Evite contacto con los ojos, piel y ropa. En caso de contacto, lave con abundante agua.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15-30 ° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser claro y de color liegramente naranja. Si se forma una precipitación café, indica deterioro y no debe usarse.

REACTIVO TPTZ - (Cat No. 1202)

INGREDIENTES REACTIVOS:

12.0 mM TPTZ en metanol, incluye estabilizador.

PRECAUCIONES:

El metanol es tóxico. No se inhale o ingiera.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15 - 30 ° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

DETERIORO:

El reactivo debe ser claro y en color amarillo pálido. Si se forma un precipitado, indica deterioro y no debe usarse.

CALIBRADOR DE ACIDO URICO ATPZ - (Cat No. 1203)

INGREDIENTES REACTIVOS:

10 mg/dL Acido Urico. Estabilizador y Preservativo incluídos.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Almacene a 15 - 30 ° C. Es estable hasta la fecha de caducidad si se mantiene bien cerrado.

DETERIORO:

La falla en alcanzar los valores propios del ensayo para el control de suero indicará posible deterioro.

INSTRUMENTOS

Use un espectrofotómetro adecuado o colorímetro calibrado a 590 nm.

RECOLECCION DE LA MUESTRA

PRECAUCIONES:

1. Separe el suero del coágulo lo más pronto posible.

2. Evite contaminación bacterial la cual puede destruír el ácido urico.

3. Muestras hemolizadas no se deben usar.

ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS:

El suero de ácido urico aparece estable por siete días a 2-8° C. Puede ser congelado por seis meses (8).

ADITIVOS:

No se requieren aditivos o preservativos especiales.

SUSTANCIAS INTERFERENTES:

1. Anticoagulantes con complejo metálico no deben usarse (p. ej., EDTA, citrato, oxalato).

2. Los pacientes bajo terapia de Acido Ascórbico (Vitamina C) pueden mostrar falsas elevaciones.

3. Young, et al (9), han revisado los efectos del medicamento en suero de ácido urico.

PROCEDIMIENTO

MATERIAL PROPORCIONADO:

REACTIVO AMORTIGUADO - FERRICO (Cat No. 1201), REACTIVO TPTZ (Cat No. 1202) y CALIBRADOR DE ACIDO URICO (Cat No. 1203).

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS:

1. 0.02 mL micropipetores

2. 2.00 mL pipetor o dosificador

3. 0.20 mL micropipetor (opcional)

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de Onda 590 nm

Selección de Filtro 580-610 nm

Tipo de Reacción Punto final

Tiempo de Incubación y Temperatura 15 min. a 25° C / 10 min. a 37° C

Volumen de la muestra 0.02 mL

Volumen del Reactivo 2.00 mL

Volumen total 2.02 mL

Normal bajo 2.02 mg/dL

Normal alto 7.0 mg/dL

Valor del Calibrador 10.0 mg/dL

PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO:

Añada 1 parte del reactivo TPTZ a 10 partes del REACTIVO AMORTIGUADO - FERRICO. Menear para mezclar. Use dentro de 12 horas de preparación. No refrigerar.

METODO ALTERNATIVO:

Refiérase a la aplicación específica del instrumento para instrucciones.

DESEMPEÑO DE LA PRUEBA:

1. Coloque 2.00mL del Reactivo en Función en tubos etiquetados: Blanco de Reactivos, Calibrador, Control, Muestra 1, etc.

2. Coloque 0.02 mL de la muestra en un tubo debidamente etiquetado. Use agua desionizada como muestra para el Blanco de Reactivo. Mezcle bien.

3. Permita a las muestras de la prueba estar a temperatura ambiente por 15 min. (o 10 min. a 37° C).

4. Ajuste el instrumento a cero de absroción a 590 nm usando el Blanco del Reactivo.

5. Lea y registre los valores de absorción para el Calibrador, Control y Desconocidos.

NOTA: Para un instrumento de lectura directa, coloque la concentración de lectura del calibrador y lea las concentraciones Desconocidas directamente.

ESTABILIDAD DE LA REACCION FINAL:

Las muestras de la prueba deberan leerse dentro de 30 minutos después del desarrollo del color.

CALIBRACION:

Use el calibrador de ACIDO URICO TPTZ (Cat No. 1203) el cual se proporciona en el juego del reactivo. La linearidad del procedimiento TPTZ ACIDO URICO se extiende a 20 mg/dL.

CONTROL DE CALIDAD:

La veracidad de los resultados de la prueba deben ser monitoreados rutinariamente usando materiales de control de calidad adecuados ( normal y anormal) analizados en la misma manera como los Desconocidos. EAGLE DIAGNOSTICS ofrece CHEM - NORMAL (Cat No. 8100) y CHEM - TROL ELEVADO ( Cat No. 8200) para este propósito. La falla en obtener los valores propios del ensayo del control del suero pueden indicar posible deterioro del reactivo y valores Desconocidos no deben ser reportados hasta que se investiguen profusamente.

NOTA: El control de suero que contiene azide como preservativo dará valores más altos que los esperados.

CALCULO DE RESULTADOS

La siguiente ecuación es usada para determinar la concentración de la muestra Desconocida:

Conc. Desc. (mg/dL) =

Abs. Desc.

-------------- X Cal. Conc. (mg/dL)

Abs. Cal.

EJEMPLO:

A 10 mg/dL el Calibrador tuvo una Absorción = 0.444 mierntras que la Absorción desconocida = 0.237. La concentración de Acido Urico de la Desconcida es:

0.237

-------- X 10 mg/dL = 5.3 mg/dL

0.444

VALORES ESPERADOS

HOMBRES 3.0 - 7.0 mg/dL

MUJERES 2.20 - 6.2 mg/dL

Los rangos representan el 95% de confianza en el intervalo para 27 hombres y 26 mujeres muestreados de una población clínicamente normal. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores esperados.

CARACTERISTICAS DE DESEMPEñO

PRECISION:

El control del suero normal y anormal fue ensayado 20 veces cada vez para establecer dentro de la precisión establecida y duarnte diez días hábiles para establecer precisión de ensayo a ensayo.

MEDIA / STD.DEV / %CV

DENTRO DEL ENSAYO

Normal 4.3 / 0.09 / 2.1

Anormal 11.1 / 0.13 / 1.2

DE ENSAYO A ENSAYO

Normal 4.3 / 0.16 / 3.8

Anormal 10.8 / 0.25 / 2.3

ESPECIFICIDAD:

Una comparación de este PROCEDIMIENTO (TPTZ) DE ACIDO URICO con otro procedmiento comercial ampliamente usado mostró una correlación de 99% para 21 muestras de suero humano en el rango de normal y anormal.

SENSIBILIDAD:

Este PROCEDIMIENTO (TPTZ) DE ACIDO URICO tiene una sensibilkidad de 0.02 mg/dL por 0.001 unidad de absorción.

REFERENCIAS

1. Tietz, N.W., Fundamentals of linical Chemistry, 2nd Ed., W.B. Sounders Co., Philadelphia, (1976,), p. 999

2. Carroll, J., Colburn, H., Douglas R., y Babson, A. L., Clin. Chem. 17, 158 (1971).

3. Remp., D.G., Clin. Chem. 6,1(1970)

4. Gochman, N., y Schmitz , J.M., Clin. Chem. 17, 1154 (1971)

5. Trevedi, R.C., Rebar, L., Bertha, E., y Strong, L. Clin. Chem. 24, 1908 (1978).

6. Morin, L.G., y Prox, J., Am. J. Clin. Chem. Path. 60. 691 (1973).

7. Morin, L.G., Clin. Chem. 20, 51 (1974)

8. Dobbs, C.A., J. Biol. Chem. 218, 497 (1956)

9. Young, D.S., Pestaner, L.C. y Gibberman, V., Clin. Chem. 21, 373D (1975).